Advanced Search

المحرر موضوع: & تقنيــــــــــات البصمـــــــة الوراثيـــــــة &  (زيارة 2173 مرات)

0 الأعضاء و 1 ضيف يشاهدون هذا الموضوع.

يوليو 03, 2007, 01:26:23 صباحاً
زيارة 2173 مرات

دمعة المقهور

  • عضو مساعد

  • **

  • 220
    مشاركة

    • مشاهدة الملف الشخصي
:: السلامـ عليكمـ ورحمة الله وبركاته ::



ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ
المصدر :: موسوعة تكنولوجيا الحامض النووي في مجال الجريمة
الجزء الاول / بصمة الحامض النووي ... المفهوم والتطبيق
المؤلفان :: عبدالباسط محمد الجمل  و مروان عادل عبده
ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ

>>>ان شاء الله سوف نأخذكم في جولة حول مراحل تقنيات البصمة الوراثية <<<

 ':cool:'  عندما تقابل الحقيقـــــة من يكشف عنهــــــا ؟؟!!!!

تابعونا >>>>>
 
Ooما زلت أبحث في وجوه الناس عن بعض الرجالoO
Ooعن عصبة يقفون في الأزمـــــات كالشم الجـبــالoO



Ooفإذا تكلمت الشفاه سمعت ميـــــــزان المقــــــــالoO
Ooوإذا تحركت الرجال رأيت أفعــــال الرجـــــــالoO
                  

يوليو 03, 2007, 11:30:51 مساءاً
رد #1

دمعة المقهور

  • عضو مساعد

  • **

  • 220
    مشاركة

    • مشاهدة الملف الشخصي
& تقنيــــــــــات البصمـــــــة الوراثيـــــــة &
« رد #1 في: يوليو 03, 2007, 11:30:51 مساءاً »
مقدمة ::

كان اعتماد الاثبات الجنائي على تفديم ادلة ارتكاب مجرم ما لجريمة ما يعتمد على الوسائل التقليدية للبحث الجنائي ، من خطة بحث وطرق رفع البصمات الخاصة بالاصابع ثم تطورت وسائل الاثبات وتم استخدام البصمات البيومترية كبصمة الاذن وبصمة العين وبصمة طابع الاسنان وبصمة الوجه وبصمة الصوت .....الخ .

ولكن مع تقدم البيولوجيا الجزيئية وتكنولوجيا الحامض النووي بدأ العلماء يتعرفون على التتابعات الدناوية المميزة للفرد وهو ماعرف ببصمة الحامض النووي DNA Fingerprint  وكان ذلك في بداية الثمانينيات عندما استطاع العالم البريطاني (أليك جيفري) اكتشاف بصمة الحامض النووي ثم تتابعت تقنيات البصمة الوراثية باستخدام تكنيك تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) ثم استخدام الدنا الميتوكونديري ثم استخدام تكنيك قراءة التتابعات DNA-Sequencing .

 ':cool:'  عندما تقابل الحقيقة من يكشف عنها ::
في بداية الثمانينيات اتجه العلماء الى دراسة تتابعات من القواعد الآزوتية تجاور بعض الجينات وهي تتابعات متكررة ولكن اعداد تكراريتها هي التي تختلف من شخص لآخر ولذلك سميت بالتتابعات المتكررة المختلفة العدد واللصيقة ببعض تسلسلات المورثات كالتتابعات اللصيقة بجين ألفا جلوبين الذي يشفر لتكوين بروتين ألفا جلوبين وكان هذا يمثل بداية التفكير بشكل عميق في هذه التتابعات .
وفي عام 1984م كان العالم البريطاني أليك جيفري يقوم بدراسة بروتين الميوجلوبين وكان يستدل على وجود جين الميوجلوبين بالكشف عن تتابعات لصيقة ومتكررة وهذا جعله يتجه الى عمل دراسة مقارنة للتتابعات اللصيقة المتكررة بالقرب من تسلسلات جين الميوجلوبين لاكثر من شخص ومن ثم تحولت بؤرة اهتمامه من دراسة تسلسلات جين الميوجلوبين وقد خلص العالم جيفري من هذه الدراسة الى ان هذه التتابعات اللصيقة المتكررة يمكن ان تميز شخصا عن آخر حيث يكون لكل شخص تتابعات بتكرارات مختلفة من هذه التسلسلات اللصيقة تختلف عن تكرارات شخص آخر وهذه الاختلافات تشمل جميع البشر بما في ذلك افراد الاسرة الواحدة وقد اطلق على تلك التتابعات المميزة للشخص اسم البصمة الوراثيةGenetic Fingerprint  .

وقد تتابعت الدراسات لاكتشاف المزيد من التتابعات اللصيقة المميزة منذ 1984 وحتى 1999م حيث اثبتت البصمة الوراثية فاعلية كبيرة في المجال التطبيقي عند استخدامها في كثير من المجالات .
وقد سميت التتابعات اللصيقة بالبصمة الوراثية لانها تحدد هوية الانسان من بين كل البشر فيما عدا التوائم المتماثلة وهو ما يتفق مع تعريف البصمة الوراثية من كونها التتابعات الجينية الدالة على هوية كل فرد بعينه ودلالتها على الهوية تمنحها مصطلح بصمة والتصاقها بجوار مورثات بعينها يمنحها مصطلح وراثية .

>>>>>>>
 
Ooما زلت أبحث في وجوه الناس عن بعض الرجالoO
Ooعن عصبة يقفون في الأزمـــــات كالشم الجـبــالoO



Ooفإذا تكلمت الشفاه سمعت ميـــــــزان المقــــــــالoO
Ooوإذا تحركت الرجال رأيت أفعــــال الرجـــــــالoO
                  

يوليو 03, 2007, 11:38:13 مساءاً
رد #2

طالبة كيمياء

  • عضو مبتدى

  • *

  • 96
    مشاركة

    • مشاهدة الملف الشخصي
& تقنيــــــــــات البصمـــــــة الوراثيـــــــة &
« رد #2 في: يوليو 03, 2007, 11:38:13 مساءاً »
نتظر البقية

يوليو 04, 2007, 10:29:09 صباحاً
رد #3

ابو الحروف

  • عضو خبير

  • *****

  • 1993
    مشاركة

    • مشاهدة الملف الشخصي
& تقنيــــــــــات البصمـــــــة الوراثيـــــــة &
« رد #3 في: يوليو 04, 2007, 10:29:09 صباحاً »
وعليكم السلام ورحمة الله وبركاته

اختي الفاضلة دمعة المقهور..

بارك الله بك اختي الفاضلة.. بانتظار المزيد منك..

يوليو 04, 2007, 12:48:57 مساءاً
رد #4

المجد الاصيل

  • عضو متقدم

  • ****

  • 513
    مشاركة

  • عضو مجلس الكيمياء

    • مشاهدة الملف الشخصي
& تقنيــــــــــات البصمـــــــة الوراثيـــــــة &
« رد #4 في: يوليو 04, 2007, 12:48:57 مساءاً »
السلام عليكم ورحمة الله وبركاته...

أختي الحبيبة دمعة المقهور...
موضوع رائع  ومشوق ننتظر بقيته..
جزاك الله خيرا ووفقك لما يحبه ويرضاه..


 '<img'>

يوليو 04, 2007, 02:49:48 مساءاً
رد #5

دمعة المقهور

  • عضو مساعد

  • **

  • 220
    مشاركة

    • مشاهدة الملف الشخصي
& تقنيــــــــــات البصمـــــــة الوراثيـــــــة &
« رد #5 في: يوليو 04, 2007, 02:49:48 مساءاً »
وعليــــكمـ الســــــــــلامـ :
استاذي الفاضل ابو الحروف واختي العزيزة طالبة كيمياء والعبقرية المجد الاصيل /
شكرا لكمـ على المرور الجميل وان شاء الله تجدوا الفائدة وتستمتعوا معنا ,,,
 '<img'>
 
Ooما زلت أبحث في وجوه الناس عن بعض الرجالoO
Ooعن عصبة يقفون في الأزمـــــات كالشم الجـبــالoO



Ooفإذا تكلمت الشفاه سمعت ميـــــــزان المقــــــــالoO
Ooوإذا تحركت الرجال رأيت أفعــــال الرجـــــــالoO
                  

يوليو 04, 2007, 03:50:43 مساءاً
رد #6

دمعة المقهور

  • عضو مساعد

  • **

  • 220
    مشاركة

    • مشاهدة الملف الشخصي
& تقنيــــــــــات البصمـــــــة الوراثيـــــــة &
« رد #6 في: يوليو 04, 2007, 03:50:43 مساءاً »
>>>>>>>

مراحل تقنيات البصمة الوراثية

مرت تقنيات البصمة الوراثية بالعديد من المراحل وكانت كل مرحلة تمثل انجازا في المراحل التطورية لهذه التقنيات .

اولا: تقنية الحزم الوراثية : Restriction Fragments Length Polymorphism

 تسمى هذه التقنية بتقنية (RFLP) واول من استخدم هذه الطريقة هو العالم البريطاني "أليك جفري" وتعتمد هذه الطريقة على عزل واستخلاص الحامض النووي من الخلية وتنقيته ثم معاملته بخليط من انزيمات القطع البكتيرية حيث يؤدي ذلك الى تقطيعه الى حزم دناويه DNA Bands  ، ثم يتم التفريد الكهربي للحزم الدناوية DNA Electrophoresis   ، ثم بعد ذلك تنقل باندات الدنا على غشاء من النيتروسليلوز في عملية تسمى بــ DNA Blotting ، ثم يضاف منقب عبارة عن تتابع من النيوكليوتيدات محددة في شكل سلسلة مفردة يمكنها ان ترتبط بالتتابع المكمل لها على الغشاء ، ويظهر التكامل بالتصوير بواسطة الاشعة السينية (X-Ray) في شكل بقع سوداء حيث يتم بعد ذلك تحليل النتائج بواسطة قاعدة بيانات حاسوبية.

تعتمد هجرة الحزم الدناوية على الجل في التفريد الكهربي على الوزن الجزيئي لهذه الحزم فالحزم كبيرة الوزن الجزيئي تظهر في التفريد الكهربي في المستوى الاعلى من الجل اما الحزم متوسطة الوزن الجزيئي تظهر في المستوى المتوسط من الجل اما الحزم الصغيرة الوزن الجزيئي تظهر في المستوى الاسفل من الجل.
,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,



,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,

في تقنية نقل الحزم على غشاء من النيتروسليلوز فان المنقب Probe  المضاف الى الحزم بعد نقل الحزم الى الغشاء من النوع المرقم اشعاعيا ويسمى "Labeled Probe" ، ويتم الكشف عنه بواسطة تعريض الفيلم للاشعة السينية ، يحتاج ذلك الى مراعاة احتياطات الامان ، حيث يكون للتعامل مع الجزيئات البيولوجية المرقمة احتياطات امان ، ويكون للتعامل مع الجزيئات البيولوجية المرقمة اشعاعيا خطورة على النظام البيولوجي .


ان عملية التعارف وتحديد الجاني في تقنيات ال(RFLP) تعتمد على محورين مهمين :

الاول : حدوث تزاوج او تكامل بين حزم الدنا من العينة البيولوجية (المأخوذة من مسرح الجريمة) وحزم المنقب المضاف .
الثاني : مكان حدوث التزاوج على الجل .

ان حدوث التزاوج يؤكد تكامل التسلسلات الدناوية DNA sequences بين عينتي الحامض النووي ، اما ظهور الحزم المتكاملة لكل من :

1.   حزمة الدنا DNA من خلايا العينة المنقولة من مسرح الجريمة مع حزمة الدنا من المنقب .
2.   حزمة الدنا من خلايا المتهم مع حزمة الدنا المنقب .

في موضوعين متساويين في الوزن الجزيئي في المستوى الافقي ، فهذا يؤكد حجية ان العينة البيولوجية الموجودة في مسرح الجريمة والتي عزل منها الحامض النووي DNA هي من المتهم .
   
قد تكون العينة البيولوجية خلايا دم او خلايا شعر او خلايا من انسجة مكشوطة او خلايا عالقة في افرازات ما او ملتصقة على بقايا السجائر الملقاة في مسرح الجريمة لذا يتم في هذه الحالة عزل الحامض النووي من جميع العينات البيولوجية التي عثر عليها في مسرح الجريمة وكذلك عزل الحامض النووي من جميع عينات دم من المتهمين ثم المعاملة بانزيمات القطع والنقل على غشاء نيتروسليلوز او غشاء نايلون ، وعمل تهجين بين حزم الدنا من عينات مسرح الجريمة وعينات المتهمين وعينة الضحية ، ثم يتم التفريد الكهربي والتصوير بالاشعة السينية وملاحظة حدوث التزاوج (Matching) بين حزم الدنا من المصادر السابقة .

>>>>>>>>>
 
Ooما زلت أبحث في وجوه الناس عن بعض الرجالoO
Ooعن عصبة يقفون في الأزمـــــات كالشم الجـبــالoO



Ooفإذا تكلمت الشفاه سمعت ميـــــــزان المقــــــــالoO
Ooوإذا تحركت الرجال رأيت أفعــــال الرجـــــــالoO
                  

يوليو 04, 2007, 04:08:06 مساءاً
رد #7

دمعة المقهور

  • عضو مساعد

  • **

  • 220
    مشاركة

    • مشاهدة الملف الشخصي
& تقنيــــــــــات البصمـــــــة الوراثيـــــــة &
« رد #7 في: يوليو 04, 2007, 04:08:06 مساءاً »
>>>>>

ثانيا : تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل PCR :

المقصود بالـ PCR كجهاز ماكينة لها القدرة على على تغيير درجة الحرارة رفعا وخفضا بما يلائم الهدف من ذلك وعلى سبيل المثال فهي ترفع درجة حرارة من 94 م ثم تخفضها الى 50م ثم ترفعها الى 72م وكل ذلك يمثل دورة زمنية قد يكون زمنها الكلي دقيقتين ، وتتكرر هذه الدورة حسب الطلب وقد تصل درجة التكرار الى حوالي 35 مرة اما الـ PCR كتفاعل فهو تفاعل بلمرة متسلسل Polymerase Chain Reaction  ويعني ذلك ان السلسلة المتضاعفة من الحامض النووي في نهاية الدورة الاولى تدخل في الدورة الثانية ولذا فهو يأخذ الشكل السلسلي في التفاعل .
ان الهدف من استخدام تفاعل الـ PCR هو الاكثار العددي لقطعة من قطع الـDNA  بحيث نحصل في النهاية على ملايين النسخ من التتباع المطلوب .

عند رفع درجة الحرارة الى 94 م يحدث فك للسلسلة المزدوجة من الحامض النووي DNA حيث يحدث تكسير للروابط الهيدروجينية وتنتج من هذه الخطوة سلسلتان مفردتان من الـ DNA وتعرف هذه الخطوة بفك الازدواج او الـ Denaturation .
يحدث بعد ذلك خفض درجة الحرارة الى 50 م ، وهذا يتيح للبادئين الارتباط مع ما يكملهما من تتابعات في كل من السلسلتين الفردتين حيث يرتبط احد البادئين مع احدى السلسلتين في الاتجاه 3 اما البادئ الآخر فيرتبط مع السلسلة الاخرى في الاتجاه 5 ، وتعرف هذه الخطوة باسم خطوة الالتحام او الـ Annealing. كما في الشكل التالي :
ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ

ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ
يتم بعد ذلك رفع درجة الحرارة الى 72 م ، حيث يحدث البناء للسلاسل بواسطة انزيم بوليميريز يتحمل درجات الحرارة العالية ويسمى بالـ (Taq)  وهو مستخلص من بكتيريا محبة للحرارة تعرف بـ Thermophilus aquaticus ومادة البناء في هذه الحالة تتمثل في مخلوط القواعد النيتروجينية الممثل في A,T,G,C الموجود في مخلوط التفاعل وتمثل عملية البناء في هذة الحالة تمديدا بنائيا على قالب من البادئ المرتبط ارتباطا تكامليا مع الـ DNA ويسمى ذلك بـ Extension وتوجد اجيال مختلفة من اجهزة الـ PCR  
ومن احدث الاجهزة الجيل المزود في دورته الحرارية بدرجة نهائية تمثل درجة حفظ المخلوط المضاعف من الحامض النووي وتكون على 4م كما ان هذا النوع من الاجهزة يواصل عملية المضاعفة على ما تم من قبل من دورات عند انقطاع التيار الكهربي ثم تشغيله ومن ثم لا يحدث تأثير في العينات اما الاجيال الاقدم اذا انقط التيار الكهربي ثم اعيد تشغيله لا يعمل الا اذا اعيد تشغيله طبقا ووفق البرنامج مرة اخرى وهذا يؤثر على عملية المضاعفة كما انه لا يتحول لثلاجة وهذا بعرض الحامض النووي مع طول الفترة الزمنية لاحتمالية التكسير الجزئي .

ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ



جهاز الـ PCR الذي يحدث داخله تفاعل الـ PCR (تفاعل البلمرة المتسلسل) حيث يتم صناعة بلايين النسخ من نسخة واحدة من الدنا .
ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ
تتم بعد ذلك عملية تجربة القطع الدناوية المكثرة بواسطة جهاز الـ PCR على الجل من خلال الالكتروفوريسيز حيث يتم تحضير جل من خلال اذابة مادة الآجاروز في محلول منظم يسمى تريس بورات ادتا او تريس اسيتات ادتا ثم يحدث لهذا المخلوط عملية الطبخ بواسطة الميكروويف ثم يترك ليبرد ويضاف بعد ذلك 1/2 ميكرولتر من مادة الاثيديوم بروميد ثم يصب في صندوق الصب مع وضع المشط المسنن ثم يترك ليجمد .

بعد ان يجمد الجل يتم ازالة المشط منه حيث تتكون مكان سحب المشط من الجل آبار تعرف بالـWells ويختلف حجم العينة حسب حجم سن المشط الذي يدخل في الجل حيث يتم حقنه بكمية من الحامض النووي في هذه العيون باستخدام محقن دقيق يعرف بــ Micropipete، ويتم الحقن اما داخل المحلول المنظم الموجود داخل وحدة جهاز الالكتروفوريسيز او خارجها ، مع مراعاة ان المحلول نفسه المستخدم في صندوق في جهاز الالكتروفوريسيز يكون هو نفسه المستخدم في تجهيز الجل . بعد تشغيل التيار الكهربي يكون القطب السالب ناحية آبار الحقن للدنا يحدث هجرة للـ  DNA المحقون عبر الجل وهذا يؤدي الى تفريد الحامض النووي في شكل قطع صغيرة تعرف بالباندات والتي تظهر بالشكل المفلور عند تعرضها للاشعة فوق البنفسجية .يمكن نقل الباندات على غشاء من النيتروسيليلوز او النايلون ثم اضافة المنقبات المشععة والكشف عنها باستخدان الاشعة السينية.


>>>>>>



 
Ooما زلت أبحث في وجوه الناس عن بعض الرجالoO
Ooعن عصبة يقفون في الأزمـــــات كالشم الجـبــالoO



Ooفإذا تكلمت الشفاه سمعت ميـــــــزان المقــــــــالoO
Ooوإذا تحركت الرجال رأيت أفعــــال الرجـــــــالoO